常見的幾種禽病毒病取樣技術

在防治畜禽疾病中，很多畜禽傳染病的臨床症狀不明顯，單憑臨床經驗是難以做到確切診斷、準確用藥，往往因此而貽誤了病情。為此，需要通過從病畜或屍體採取病料，進一步做微生物學和血清學化驗，查清病原，進而有針對性地採取相應的防治措施，以達到預防、控制和撲滅傳染病的目的，同時減少臨床工作的盲目性，提高獸醫人員的技術水平，保護養殖戶的利益。而病料採集、儲存、送檢的方法是否正確，直接影響到檢驗的結果和防治工作的開展，故採集檢測樣品是診斷檢測工作的重要內容，另外取樣的時機是否適宜，樣品是否具有代表性，樣品處理、儲存、運送是否及時等，都會影響到檢驗結果的準確性和可靠性。

下面就如何正確地採集、儲存、送檢病料等進行歸納和整理，希望能夠對基層獸醫和養殖戶提供一些借鑑。

一、採集原則 

1，新鮮、具代表性，且足量：採集死禽樣本，夏天6小時之內完成，冬天在24小時之內完成；採集樣品的數量要滿足診斷檢測的需要，並留有餘地，以備必要時複檢使用。

2，減少對病料的汙染：在做屍體剖檢時，應將屍體浸泡在消毒劑溶液中，防止羽毛及皮屑飛揚對病料造成的汙染；病料採集時，對採集病料的器械及容器必須提前消毒，減少因器械或盛放病料的容器對病料的汙染；屍體剖開腹腔時，第一時間採取病料，減少病料因暴露於空氣中而造成的汙染。

3，典型取樣：選取未經藥物治療、症狀最典型或病變最明顯的樣品，如有併發症，還應兼顧取樣。

4，合理取樣：根據診斷檢測的要求，須嚴格按照規定採集各種足夠數量的樣品外，不同疫病的需檢樣品各異，應按可能的疫病側重取樣。對未能確定為何種疫病的，應全面取樣。

5，安全取樣：既要保護取樣人員，以要防止病原外洩，還要防止樣品受到汙染。

6，迅速送檢：應儘快送實驗室進行檢測，延誤送檢時間，會影響到檢測質量和結果的可靠性。

二、病料的採集方法

1，組織和實質器官的採集：剖開腹腔後，必須注意腸管的完整。如需進行細菌的分離培養，要以燒紅的手術刀片燙烙臟器表面，使用經火焰滅菌的接種針插入燙烙的部位，提取少量的組織或液體，作塗片鏡檢或接種於培養基上，進行培養。

2，液體病料的採集：採集血液、膽汁、膿腫液、滲出物等液體病料，使用滅菌吸管或注射器，經燙烙部位吸取病變組織的液體，將病料注入滅菌的試管中，塞好棉塞送檢。

3，全血的採集方法：用滅菌注射器自雞的心臟或翅靜脈採血2-5毫升，注入滅菌試管中。建議加入少量的抗凝劑（3.8%枸櫞酸鈉0.1-0.5毫升或檸檬酸鈉液，配製方法：葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml高壓滅菌10磅/10分鐘。）

4，血清的採集方法：用滅菌注射器自禽的心臟或翅靜脈採血2毫升，注入滅菌的1.5ml離心管中擺成斜面，待血液凝固血清析出後，將血清吸出注入另一個滅菌試管中，備用。

5，腸道及腸內容物的採集方法：選擇病變明顯部位的腸道，將內容物棄掉，用滅菌生理鹽水沖洗乾淨，然後將病料放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩衝液中送檢。亦可將腸管切開，用滅菌生理鹽水沖洗乾淨，然後用燒紅的手術刀片燙烙粘膜表面，將接種針插入粘膜層，取少量病料接種於培養基上。採集腸內容物則需用燒紅的手術刀片燙烙腸道漿膜層，將接種針插入腸道內，吸取少量腸內容，放入試管中或將帶有腸內容的腸道兩端紮緊，去掉其它部分送檢。

6，面板及羽毛的採集：面板要選病變明顯部分的邊緣，採取少許放入滅菌的試管中送檢；羽毛也要選病變明顯部分，用滅菌的刀片刮取羽毛及根部的皮屑少許，放入滅菌的試管中送檢；採集孵化室的絨毛需用滅菌鑷子採取出雛機出風口的絨毛3-5克，放入滅菌的試管中送檢。

三、各種病料的採集部位

表1雞病毒性疾病主要採集的主要部位

四、病料的儲存和處理 

1，採集的樣品應一種樣品一個容器，立即密封，防止樣品損壞、汙染和外洩等意外發生。也可以根據表1將幾種適合檢測同種病毒的病料合併於一個容器內。

2，裝樣品的容器應貼上標籤，標籤要防止因凍結而脫落，標籤標明採集的時間、地點、號碼和樣品名稱，並附上發病、死亡等相關資料，儘快送實驗室。

3，根據樣品的性狀檢驗要求的不同，作暫時的冷藏、冷凍或其它處理。

4，病料採集後，應先存放於冰箱中1-2小時後，再做微生物檢驗。 

五、病料的送檢要點 

1，在沒有條件的情況下，可以採取運送整雞、鵝或鴨屍體，運送時用浸透消毒液的布包好，裝入塑料袋中運送；如果需要長途運輸，整個屍體放入冰箱冰凍過夜。

2，裝在容器中的病料應先密封，然後裝入冰桶中運送，放入冰袋運送。

3，運送的病料必須標明：送檢單位、地址、送檢病料的品種、性別、日齡、種類、數量、死亡日期、送檢日期、檢驗目的、送檢者姓名，並附臨床病例摘要（發病時間、死亡情況、臨床症狀、產蛋及飲食情況、免疫和用藥情況等）。

4，運送病料時一定注意病料要低溫儲存。供病毒學檢驗的樣品，數小時內要送到實驗室，只作冷藏處理，超過數小時的要冷凍處理，可將樣品放入-30℃冰箱內凍結後再裝入有大小冰塊或乾冰的冷藏瓶（箱）內運送，亦可將裝入樣品的容器放入隔熱保溫瓶內，再放入冰塊，然後按100ｇ冰塊加入食鹽約35克，立即將隔熱保溫瓶瓶口塞緊，瓶內溫度可達-21℃左右。