影響雞傳染性支氣管炎診斷的因素
很少有方法可用於傳染性支氣管炎 (IB) 診斷，以識別當前感染中的病毒或病毒感染後的特異性抗體反應。由於多種因素的影響，選擇成功檢測雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)的最佳檢測方法是困難且令人困惑的，如下所述。
1.臨床體徵
IBV 的臨床症狀與其他呼吸道感染相似，但有一些獨特的病變是毒株變異的一部分，難以與其他呼吸道病毒感染區分開來。儘管臨床症狀根據圖譜進行匹配，但血清學研究從未根據解剖病變進行匹配。
血清學滴度偶爾有升高趨勢，但與臨床症狀不符；因此，IBV確認是有問題的。因此，構象診斷是基於農場記錄中資料的積累，包括雞蛋質量和產量曲線、死亡率、血清轉化或抗體水平、疫苗接種報告和血液血清學，這些是通過PM病變同時匹配IBV雞的症狀的臨床體徵。 IBV 分離的樣本採集最好立即進行，因為臨床症狀很明顯。逆轉錄 RNA 的 PCR 是檢測活動性感染中 IBV 的有效方法。一些研究表明，營養缺乏是檢測 IBV 的一個重要考慮因素。
2.疫苗接種
疫苗接種是IBV鑑定的主要影響因素，因為它需要感染的IBV疫苗株和其他強毒株。對於未接種疫苗的雞群，可以通過 RT-PCR、RT-qPCR 或幾周後的陽性 IBV 滴度簡單地檢測到現場攻擊。因此，由於血液中的抗體迴圈，在已接種疫苗的雞群中識別現場挑戰或主動感染非常困難。如今，疫苗株可以通過使用滅活油乳劑疫苗的區分感染者與接種動物（DIVA）技術來區分疫苗株與現場毒株，該技術可以通過簡單的中和試驗、酶聯免疫吸附測定(ELISA)和間接免疫熒光試驗進行檢測。
3.檢測選擇
診斷技術的選擇對於與樣本採集和取樣數量相關的正確診斷非常重要。先進的 ELISA 測試可以區分疫苗接種產生的抗體和感染產生的抗體。
感染後2-4周後抗體滴度濃度趨於異常升高;在隨後的幾周內滴度逐漸緩慢下降。隨後，下一次血樣應在2周後採集，但不得晚於4周，在同一受感染的房屋中採集，因為由於免疫系統需要時間來建立免疫力，因此滴度延遲到最高水平。
感染後3-5天內，受感染組織中病毒濃度最高;需要選擇分子測定和病毒分離來代替血清學監測。目前，常見的分子方法已應用於 IBV 診斷，特別是 RT-PCR，但IBV分離更具挑戰性、耗時，並且只能從受感染的雞中分離，因為需要在含胚雞蛋中進行多次傳代，直到病毒複製。或者，由於引物結合位點頻繁發生突變，各種型別的變體可能會逃避識別，因此需要經常更新引物以應用於分子測定。
4.血清學
平均滴度提供了接種疫苗後雞群內受測禽類抗體反應的資訊。平均滴度應達到可預測的範圍，正常雞群的平均滴度分佈均勻，患病雞群的滴度無意中更高。
一項研究表明，疫苗免疫的抗體模式不應因現場感染而被破壞。感染後，當滴度水平比疫苗接種後預期水平高至少2倍或感染前平均滴度水平至少 2 倍時，幾何平均滴度(GMT)應異常增加。有時，接種疫苗後平均滴度會逐漸升高；然而，正常生產時未發現任何臨床症狀，表明疫苗具有良好的保護作用和更好的反應。
根據一般引數，滅活疫苗接種後變異百分比係數（CV）保持在40%以下，活疫苗接種後保持在60%以下，表明疫苗接種均勻性良好。當CV小於20%時，滴度水平表現出良好的均勻性，但指定了以前的疾病暴露或良好的疫苗接種。因此，有必要與死亡率、臨床體徵和生產記錄進行交叉比對，以最終確認IBV。對CV百分比的良好評估顯著低於疫苗接種後的預期水平或顯著低於早期感染病例的水平。因此，單次注射 IBV 活疫苗後CV%低於30% 則被指定為可疑挑戰。相反，在接種高免疫原性 IBV 變種疫苗後，CV百分比通常低於45%。在這種情況下，在接種滅疫苗之前，首先使用一系列多重活疫苗接種來促進禽類100%血清轉化，這是影響滴度永續性而不是CV百分比測量的主要原則。
5.器官選擇和樣本質量
上呼吸道(UTI)是IBV複製的主要部位；隨後，病毒血症導致病毒增殖並通過血液迴圈傳播到其他組織 。由於受感染或免疫雞群的持續交叉感染，IBV可在盲腸扁桃體和腎臟中長期持續存在。在急性病例中，臨床症狀是在呼吸道中發現的，這是彙集樣本的首選地點。此外，在產蛋階段接種疫苗的雞的慢性感染中選擇了腎臟、盲腸扁桃體和洩殖腔樣本，而在呼吸道中可以預測到少量病毒。收集器官應更快地冷藏，以保留病毒活力以進行進一步的分子診斷。如果沒有冷凍或冷藏設施，樣品應在 50% 甘油中儲存幾天。
6.感染期間的免疫和挑戰
血清學監測可以直接幫助評估禽類的免疫狀態、病毒攻擊和病毒感染持續時間。不同型別的商業 ELISA 試劑盒使用不同的截止值和數學公式來計算以轉換 ELISA 結果。農業中增強免疫力以控制 IBV 感染的最常見做法是先接種減毒活疫苗，然後接種具有正常滴度水平的滅活疫苗，以提供良好的 IBV 保護。
IBV 攻擊通常會在感染後 6-8 周後檢查異常高的 IBV 滴度時顯示呼吸道症狀。對於種雞，計算受攻擊雞的正常指導是感染後的平均滴度至少是疫苗接種滴度(基線)預期的 2 或 3 倍，如圖所示圖A、B 。對於肉雞，攻擊中通常會顯示異常的 IBV 滴度，而在活疫苗接種與正常血清學相關後，感染後的平均滴度應超過 3-4 K (Idexx 標準)，如圖分別為C、D。
在 ELISA 檢測中，應根據疫苗接種計劃、IBV 的地理分佈、爆發歷史、特定疫苗和檢查的禽類型別，通過預期的疫苗接種滴度來確定診斷。這些各自的因素與定期雞群報告的組合相關，以確定血清學結果是正常還是異常。許多因素影響抗體水平，特別是病毒株，以及與雞有關的一些因素(例如，品種、型別、年齡、免疫狀態和營養)、疫苗(例如，減毒水平、劑量、活的或死的)疫苗，和儲存條件)和疫苗接種時間表(例如，正確的時間表、準備和給藥途徑)。
圖2 比較兩個肉種雞舍中 ( A ) 攻擊雞群和 ( B ) 正常雞群 26 周時的 IBV 血清學分析。計算出受攻擊雞群的平均滴度是正常雞群的三倍，並且與之前使用美國Symbiotic檢測試劑盒進行的血清學檢測相比，變異係數(CV%)太低。產蛋高峰期 IBV 感染後的高挑戰滴度幾乎位於單個條形中。在肉雞中，( C ) 在 35 日齡觀察到的 IBV 感染後高攻擊滴度超過 3-4 K 滴度，計算為 IBV 感染後，與 ( D ) 正常血清學相比，基於美國 Idexx ELISA 檢測試劑盒的標準。
7.遺傳學和免疫抑制
遺傳性狀對IBV的抵抗力和易感性影響很大。一些實驗研究表明，IBV 免疫後不同育種品系中發現了不同的遺傳性狀、死亡率、病毒生長和可變的組織病理學。但由於雞系間的易感性存在差異，不同的檢測方法存在一定的差異。一些免疫抑制感染與 IBV 疾病的惡化有關，例如傳染性法氏囊病 (IBD)、馬立克氏病 (MD)、包涵體肝炎 (IBH) 和雞傳染性貧血 (CIA) 可能會抑制幼年時的免疫狀態，這可以通過刺激法氏囊和胸腺中的淋巴細胞耗竭來擾亂 IBV 的獲得性疫苗免疫，從而導致對攻擊的更高抵抗力。主要損害受到亞臨床感染的影響，因此很難理解免疫抑制劑。
用於確認 IBV 感染的實驗室診斷方法涉及其他呼吸道病毒，這些病毒需要連續的血清學監測來確定當前感染的實際來源。同樣，環孢素被歸類為T細胞免疫抑制藥物，可顯著降低禽類的免疫力，並且在IBV感染中受到高度刺激。
來源：雞保姆，作者：Md. Safiul Alam