用自制藥敏試紙進行肉雞大腸桿菌病的藥敏試驗

吳樹康1  楊皓2(1．山東省龍口市畜牧獸醫工作站；2．中南民族大學生命科學院)

一　試驗材料和方法

1　藥敏試紙的製備

藥敏紙片的製備：取杭州富陽特種紙廠生產的直徑18cm的定量濾紙，用打孔器打成直徑為6mm的圓形紙片，取100片圓形紙片放入清潔乾燥的青黴素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包紮，120℃乾燥滅菌2小時備用。

藥液的製備：按獸藥說明書上標明的治療量比例配製藥液。如規格為100g的抗菌物，包裝說明兌水200千克，即用天平稱藥物1g加50mL的滅菌注射水置於滅菌器皿內，充分溶解後吸出1mL置於另一個滅菌容器中，再加入39mL的滅菌注射水。

藥敏紙片的製作：將含有100片紙片的青黴素瓶內加入配置好的藥液0.5mL，並翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，乾燥後即密封，切勿受潮，置陰暗乾燥處存放備用。

2　細菌的分離培養與鑑定

細菌的分離培養：採用常規法將細菌病料接種於麥康凱培養基上，37℃培養24小時。挑取單個菌落於普通瓊脂平板上進行純培養，37℃培養24小時。挑取單個菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，鏡下可見大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽孢直杆菌，初步確定為大腸桿菌。

生化試驗：取待檢菌培養物分別接種在蛋白腖水、緩衝蛋白腖水、枸櫞酸鹽、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂培養基上，置37℃恆溫箱中，培養24小時。結果顯示：能發酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，產酸。尿素酶試驗陰性，不產生H2S，有鞭毛，能運動。符合大腸桿菌的生化特性，證實確為大腸桿菌。

3　藥敏試驗

將麥康凱培養基上認定的大腸桿菌菌落，無菌環境下用接種環挑出，均勻塗布在營養瓊脂培養基上，同時等距離放置以下藥敏紙片：諾氟沙星、環丙沙星、頭孢噻肟、氨苄西林、多粘菌素、頭孢曲松、氟苯尼考，置恆溫箱中培養24小時，按以下標準判定藥物敏感度。

二　試驗結果

藥敏試驗結果為：本次分離的大腸桿菌對頭孢噻肟、氟苯尼考、頭孢曲松、多粘菌素高敏以上，對環丙沙星中度敏感，對諾氟沙星和氨苄西林不敏感。

三　臨診推廣應用

根據試驗結果，我們對前來就診的發生肉雞大腸桿菌病的養殖戶進行指導治療，都受到很好效果。如我市七甲鎮姜良巨集肉雞場先後購進兩批雛雞各5000只，第一批雞20日齡時出現發病，經實驗室診斷為大腸桿菌病，按常規用慶大黴素飲水治療一週後，雖然停止了死亡，但仍有部分肉雞排稀便，先後死亡500餘隻，花醫藥費1000餘元。第二批肉雞於22日齡發病，經實驗室診斷仍為大腸桿菌病，通過藥敏試驗，選用了抑菌效果高敏的氟苯尼考全群拌料治療，僅3天就將病情基本控制，再無新病例出現，之後繼續用藥兩天，雞群完全康復。僅死亡雛雞85只，醫藥費僅用650元。

四　小結與討論

用自制藥敏試紙進行藥敏試驗，能夠準確找出病原體的高敏藥物，有的放矢地消滅病原體，從而克服了試探性或盲目性用藥，減少了損失，提高了禽病的防治效果。

自制藥敏試紙經濟，一方面可以有效地指導養殖戶防治禽病，另一方面對本單位的藥品經營也有一定的指導作用。

影響藥敏試驗結果的因素有很多，如採集病料的部位、藥敏紙片或藥物濃度的變化、細菌培養條件是否達標等等，所以試驗過程一定要一絲不苟，認真對待，才會有準確的結果。